稳定细胞株构建服务

稳定细胞株构建服务： 
构建稳定细胞系的基本原理是将外源DNA克隆到具有某种抗性的载体上，载体被转染到宿主细胞并整合到宿主染色体中，用载体中所含的抗性标志进行筛选。最常用的真核表达载体的抗性筛选标志物有新霉素（neomycin）、潮霉素（hygromycin）和嘌呤霉素(puromycin)，常用G418来代替新霉素进行选择性筛选，筛选得到可稳定表达目的蛋白，或者稳定表达沉默特定基因的细胞株。

稳定细胞株的构建周期长、难度大，每一步都很关键，尤其是细胞转染，常用物理方法（电转）、化学方法（脂质体等）、生物方法（病毒），根据不同的实验条件，选择最好的方法，来达到实验目的。

蛋白过表达：

目的蛋白的过表达往往是研究该基因/蛋白功能的常规手段，也是借助表达系统富集蛋白（DHFR、GS system）的方法。蛋白过表达稳定细胞株的构建能很好的帮助研究这个蛋白，或者得到大量的目的蛋白。

科佰生物提供的蛋白过表达稳定细胞株构建服务借助于真核表达载体/慢病毒系统，构建含有目的基因CDS的质粒/病毒，通过转染/感染在各种细胞基因组上整合目的基因，利用抗生素筛选，得到稳定表达的高拷贝克隆，经过32代的稳定性QC检测，完成稳定细胞株的构建工作。

主要包含如下步骤:

1. 载体构建（表达质粒载体、病毒载体）；

2. 转染/感染；

3. 目的蛋白初步检测；

4. 抗生素筛选；

5. 目的蛋白再次检测（定性/半定量）；

6. 单克隆细胞株稳定性检测。

特殊的过表达蛋白/细胞，请事先咨询。

蛋白沉默：

目的蛋白的沉默（knock-down or knock-out）往往是研究该基因/蛋白功能的常规手段,蛋白沉默后细胞表型的检测是科研的金标准方法。

科佰生物提供的蛋白沉默稳定细胞株构建服务借助于真核表达载体/慢病毒系统，构建含有沉默目的基因（shRNA/microRNA）的质粒/病毒，通过转染/感染在各种细胞基因组上整合沉默基因，利用抗生素筛选，得到高效沉默的克隆，经过32代的稳定性QC检测，完成稳定细胞株的构建工作。

主要包含如下步骤:

1. 载体构建（沉默质粒载体、病毒载体）；

2. 转染/感染；

3. 目的蛋白初步检测；

4. 抗生素筛选；

5. 目的蛋白再次检测（定性/半定量）；

6. 单克隆细胞株稳定性检测。

特殊的过表达蛋白/细胞，请事先咨询。

诱导系统：

外源蛋白的诱导表达/沉默能很好比较本底和干预的区别，非常有力的诠释目的基因/蛋白的作用机理，特别适合研究自身具有毒性的蛋白，现已经被广泛使用。

科佰生物提供可诱导蛋白表达/沉默稳定细胞株构建服务借助于真核表达载体/慢病毒系统，构建含有“开关”控制表达/沉默目的基因的质粒/病毒，通过转染/感染在各种细胞基因组上整合载体，利用抗生素筛选，得到可诱导的稳定细胞株，经过32代的稳定性QC检测，完成稳定细胞株的构建工作。

主要包含如下步骤:

1. 载体构建（诱导质粒载体、病毒载体）；

2. 转染/感染；

3. “开关”诱导下目的蛋白初步检测；

4. 抗生素筛选；

5. “开关”目的蛋白再次检测（定性/半定量）；

6. 单克隆细胞株稳定性检测。

特殊的过表达蛋白/细胞，请事先咨询。

服务说明:

1. 稳定细胞株构建依据目的不一样，方案差异非常大，成功率差异也很大，本着对客户负责的态度，建议事先咨询，并且安排预实验；

2. 客户可以提供基因序列、载体、细胞，也可以查找本公司模板库、载体库、细胞库，也可以由我们公司代购；

3. 本服务仅对目的基因的表达、稳定性做保证，不涉及基因功能，具体基因功能检测，需要另外评估和收费；

提交的产品和资料:

1. 构建好的质粒（4ug）/病毒(1ml)，含目的基因序列/沉默序列/诱导序列；

2. 稳定细胞株2管；

3. 实验报告。